不同動(dòng)物細(xì)胞或組織的蛋白質(zhì)抽提步驟是怎樣的？

你知道不同動(dòng)物細(xì)胞或組織的蛋白質(zhì)抽提步驟是怎樣的嗎？讓我們一起來看看吧！

一、培養(yǎng)的貼壁動(dòng)物細(xì)胞的蛋白質(zhì)抽提步驟

1.從貼壁細(xì)胞培養(yǎng)瓶中小心傾去培養(yǎng)液。

2.預(yù)冷的 PBS 清洗貼壁的細(xì)胞 2 次，小心傾去 PBS。

3.配置含抑制劑的蛋白質(zhì)抽提試劑（1ml 抽提試劑中加入 5 μl 蛋白酶抑制劑混合液，5 μl PMSF 和 5 μl 磷酸酶混合液）。

4.細(xì)胞瓶中加入預(yù)冷的含抑制劑的蛋白質(zhì)抽提試劑（107 個(gè)細(xì)胞中加入 1ml 抽提試劑；5×106 個(gè)細(xì)胞中加入 0.5ml 抽提試劑），輕輕搖動(dòng) 5 分鐘。

5.用一預(yù)冷的橡膠和塑料細(xì)胞刮將培養(yǎng)瓶壁上貼壁細(xì)胞刮下來，轉(zhuǎn)移細(xì)胞懸浮液到離心管中，冰浴下?lián)u動(dòng) 15 分鐘進(jìn)行裂解。

6.裂解液于預(yù)冷的離心機(jī)中 14，000xg 離心 15 分鐘。棄去沉淀，上清液立刻轉(zhuǎn)移入新的離心管中保存待用。

二、培養(yǎng)的懸浮動(dòng)物細(xì)胞的蛋白質(zhì)抽提步驟

1.2500xg 離心 10 分鐘沉淀懸浮的細(xì)胞，棄去上清液

2.預(yù)冷的 PBS 懸浮沉淀細(xì)胞，2500xg 離心 10 分鐘沉淀細(xì)胞，去上清。

3.配置含抑制劑的蛋白質(zhì)抽提試劑（1ml 抽提試劑中加入 5 μl 蛋白酶抑制劑混合液，5 μl PMSF 和 5 μl 磷酸酶混合液）。

4.加入含抑制劑的預(yù)冷蛋白質(zhì)抽提試劑（107 個(gè)細(xì)胞中加入 1ml 抽提試劑；5×106 個(gè)細(xì)胞中加入 0.5ml 抽提試劑）。

5.輕輕搖動(dòng)混和 15 分鐘進(jìn)行裂解。

6.裂解液于預(yù)冷的離心機(jī)中 14，000xg 離心 15 分鐘。棄去沉淀，上清液立刻轉(zhuǎn)移入新的離心管中保存待用。

三、哺乳動(dòng)物組織的蛋白質(zhì)抽提步驟

1.組織稱重，切小塊放入管中。

2.配置含抑制劑的蛋白質(zhì)抽提試劑（1ml 抽提試劑中加入 5 μl 蛋白酶抑制劑混合液，5 μl PMSF 和 5ul 磷酸酶混合液）。

3.加入預(yù)冷的含抑制劑的蛋白質(zhì)抽提試劑（250mg 組織中加入 1ml 抽提試劑）。

4.用勻漿器每次 30 秒低速勻漿，每次勻漿間隔冰浴 1 分鐘，至組織wan全裂解。

5.裂解液于預(yù)冷的離心機(jī)中 14，000xg 離心 15 分鐘。上清液立刻轉(zhuǎn)移入新的離心管中保存待用。

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