Coriell人類基因組DNA標準品(NA12878)定量方法

一、DNA是如何提取的？

在2019年之前，使用Qiagen Autopure LS儀器或通過改良的Miller鹽析法手動從新鮮血液、唾液、永生化淋巴細胞和成纖維細胞中純化基因組DNA。自2019年1月1日起，gDNA的分離使用自動磁珠純化法(Hamilton Microlab STAR利用Promega的ReliaPrep大容量HT分離系統(tǒng))或手動使用改良的Miller's鹽析程序。

二、DNA質(zhì)量控制是如何進行的？

DNA濃度通過A260處的分光光度吸光度測定，使用1O.D.相當于50 ug/ml雙鏈DNA的慣例或Oubit dsDNA BR測定法，一種基于染料的熒光方法，取決于存儲庫。為了評估DNA完整性，使用Agilent TapeStation評估DNA。TapeStation軟件確定DNA完整性數(shù)字（DIN）作為gDNA完整性的度量。

用6個常染色體微衛(wèi)星標記的多重PCR方法驗證了DNA樣品的一致性。在同一反應(yīng)中，用一對額外設(shè)計的引物擴增X染色體和Y染色體釉原蛋白基因之間的等位基因差異區(qū)域來確定性別。

三、DNA樣本的濃度和體積是多少？

Coriell運送的大多數(shù)樣本在300-375 ng/ul之間，但不同的存儲庫是不同的。每個DNA樣品的濃度可在隨貨件一起提供的濃度表上找到。請注意，對于不同的存儲庫，濃度是由不同的方法確定的。

四、應(yīng)該如何重新測試DNA濃度？

我們建議使用Nanodrop或傳統(tǒng)的基于cuvelte的分光光度計，TE作為合適的樣品空白。DNA濃度可以根據(jù)A260值使用1.0 D.相當于50ug/ml雙鏈DNA的慣例來計算。

Qubit@dsDNA BR測定（Q32850:ThermoFisher Scientific）也可用于測定DNA濃度。該測定使用超靈敏熒光核酸染色，用標準熒光計和熒光素激發(fā)和發(fā)射波長定量溶液中的雙鏈DNA（dsDNA）。

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