Elabscience Caspase 1活性檢測(cè)試劑盒的常見問題有什么？如何解決？

Elabscience自主研發(fā)的Caspase 1活性檢測(cè)試劑盒采用分光光度法，可用于檢測(cè)細(xì)胞、組織裂解液或其它樣本的caspase 1 活性。那么你知道Elabscience Caspase 1活性檢測(cè)試劑盒的常見問題有什么嗎？該如何解決呢？讓我們一起來看看吧！

一、OD405 值偏低或無信號(hào)

1. 焦亡現(xiàn)象不明顯或者細(xì)胞處于焦亡晚期，細(xì)胞破碎死亡。解決方法：焦亡現(xiàn)象不明顯以及誘導(dǎo)過度至細(xì)胞死亡均無法有效檢測(cè)到 caspase 1的活化，可設(shè)置梯度誘導(dǎo)濃度和誘導(dǎo)時(shí)間選擇最佳的誘導(dǎo)方案。

2. 細(xì)胞誘導(dǎo)時(shí)的密度太大。解決方法：降低誘導(dǎo)時(shí)細(xì)胞的密度，摸索最佳誘導(dǎo)密度，推薦誘導(dǎo)濃密為5~10×105 /mL。

3. 細(xì)胞數(shù)目太少，Cell Lysis Buffer太多。解決方法：增加細(xì)胞的數(shù)量，每100萬細(xì)胞加入50~100 µL Cell Lysis Buffer。

4. 檢測(cè)總蛋白量較低。解決方法：使用Bradford 法測(cè)濃度，提高蛋白檢測(cè)的總量，可以進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)，檢測(cè)總蛋白不低于50ug。

5. 溫度較高，Cell Lysis Buffer中的DTT失活，Caspase 酶失活。解決方法：Cell Lysis Buffer 和細(xì)胞裂解過程在冰上進(jìn)行，每 10 分鐘進(jìn)行渦旋混勻一次，充分保證酶活。

6. 細(xì)胞沉淀的保存條件不佳，導(dǎo)致細(xì)胞降解，Caspase酶失活。解決方法：收集細(xì)胞沉淀后立即放入-20℃（1個(gè)月）或者-80℃（2個(gè)月）保存?zhèn)溆茫?guī)定時(shí)間內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。

7. 37℃孵育時(shí)間過長(zhǎng)。解決方法：適當(dāng)延長(zhǎng) 37℃孵育時(shí)間，建議最佳孵育時(shí)間為1~2小時(shí)內(nèi)，隨著時(shí)間延長(zhǎng)，control 組的背景數(shù)值會(huì)逐漸增大，導(dǎo)致結(jié)果偏低。

二、OD405值偏高

1. 細(xì)胞處理試劑或者藥物有顏色，且在405nm 波長(zhǎng)有吸收峰。解決方法：增加細(xì)胞離心洗滌的次數(shù)，設(shè)置細(xì)胞處理試劑的空白對(duì)照，最終實(shí)驗(yàn)結(jié)果減去藥物試劑的影響。

2. 檢測(cè)樣本中有較多氣泡。解決方法：排除氣泡后再檢測(cè)。

3. 使用回收的96孔板中有雜質(zhì)附著，導(dǎo)致結(jié)果偏高。解決方法：建議使用新的一次性 96 孔板。

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