Western blot的內(nèi)參該如何選擇

　　內(nèi)參即是內(nèi)部參照（Internal Control），對(duì)于哺乳動(dòng)物細(xì)胞來說一般是指由管家基因編碼表達(dá)的蛋白（Housekeeping Proteins），它們?cè)诟鹘M織和細(xì)胞中的表達(dá)相對(duì)恒定，在檢測(cè)蛋白的表達(dá)水平變化時(shí)常用它來做參照物。那么你知道Western blot的內(nèi)參該如何選擇嗎？讓我們一起來看看吧！

　　為什么要使用內(nèi)參

　　Western blot除了能證明某樣品含有某種蛋白之外，其最為重要的作用是比較不同條件下或者不同組織中，目的蛋白表達(dá)量的相對(duì)多少。即為蛋白表達(dá)水平最直接的證據(jù)。要衡量蛋白的表達(dá)水平，前提條件就是等量的上樣量。然而如果僅將蛋白濃度測(cè)定作為規(guī)范需相互比較的各種樣品間上樣量等同的唯1方法，顯然是不可取的。

　　在Western Blot中使用內(nèi)參其實(shí)就是在WB過程中另外用內(nèi)參對(duì)應(yīng)的抗體檢測(cè)內(nèi)參，這樣在檢測(cè)目的產(chǎn)物的同時(shí)可以檢測(cè)內(nèi)參的表達(dá)，由于內(nèi)參在各組織和細(xì)胞中的表達(dá)相對(duì)恒定，借助檢測(cè)每個(gè)樣品內(nèi)參的量就可以用于校正上樣誤差，這樣半定量的結(jié)果才更為可信。此外使用內(nèi)參可以作為空白對(duì)照，檢測(cè)蛋白轉(zhuǎn)膜情況是否完q、整個(gè)Western Blot顯色或者發(fā)光體系是否正常。

　　如何選擇內(nèi)參

　　一般來說，我們?cè)龠x擇內(nèi)參時(shí)需要考慮以下幾個(gè)因素：

　　1、蛋白表達(dá)豐度：內(nèi)參應(yīng)該在樣本中穩(wěn)定表達(dá)，且表達(dá)量相對(duì)較高，這樣才能有效地檢測(cè)到內(nèi)參信號(hào)。

　　2、分子量：內(nèi)參的分子量應(yīng)該與目標(biāo)蛋白的分子量有明顯差異，以便在電泳分離時(shí)能夠分開。

　　3、細(xì)胞類型和組織特異性：根據(jù)你的實(shí)驗(yàn)樣本類型，選擇適合的內(nèi)參。例如，β-actin常用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞，而Tubulin則更適合檢測(cè)細(xì)胞骨架蛋白。

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