WB實驗中的磷酸酶抑制劑

一、WB實驗中的磷酸酶抑制劑的作用

細胞或組織裂解時會釋放出大量內源性蛋白磷酸酶，以各種方式催化磷酸化蛋白的去磷酸化，從而影響后續(xù)的蛋白檢測。因此在提取物中適量添加外源性磷酸酶抑制劑，有利于在之后的Western blotting、免疫共沉淀檢測磷酸化蛋白質和蛋白激酶活性測定等實驗過程中抑制磷酸化蛋白的去磷酸化，維持蛋白質的磷酸化狀態(tài)。

二、WB實驗中的磷酸酶抑制劑的作用原理

在細胞信號轉導中，靶蛋白會被可將磷酸基團轉移到特定位點的蛋白激酶磷酸化。這些磷酸基團在細胞裂解時會被內源性蛋白磷酸酶去除。磷酸酶抑制劑有助于在細胞裂解和蛋白質提取過程中保持磷酸蛋白的活性和狀態(tài)。

三、常用的磷酸酶抑制劑的分類

常見的磷酸酶有蛋白酪氨酸磷酸酶、堿性磷酸酶和酸性磷酸酶，常用的磷酸酶抑制劑如下：

1. 氟化鈉（sodiμm fluoride）：酸性磷酸酶可逆抑制劑；

2. 焦磷酸鈉（sodiμm pyrophosphate）：絲氨酸/蘇氨酸磷酸酶不可逆抑制劑；

3. β-甘油磷酸（β-glycerophosphate）：絲氨酸/蘇氨酸磷酸酶可逆抑制劑；

4. 正釩酸鈉（sodiμm orthovanadate）：堿性磷酸酶和酪氨酸磷酸酶可逆抑制劑：

5. 鉬酸鈉（sodiμm molybdate）：酸性磷酸酶不可逆抑制劑；

6. 二水酒石酸鈉（sodiμm tartrate dihydrate）：酸性磷酸酶可逆抑制劑；

7. 咪唑（imidazole）：堿性磷酸酶可逆抑制劑。

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